子宫内膜癌大型队列：18%检出Claudin-6表达，其中10%高表达（2+/3+），是不良预后独立标志物与ADC潜在靶点，尤其适用于浆液性癌和癌肉瘤
时间：2026-08-24 23:19:09 热度：37.1℃ 作者：网络
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摘要
背景
晚期或复发性子宫内膜癌（EC）患者的治疗选择有限。抗体偶联药物（ADC）可将包括传统化疗药物在内的细胞毒性载荷靶向递送至癌细胞，为治疗提供了新策略。目前，靶向Claudin-6的ADC正在开展临床试验，但EC中Claudin-6的表达模式尚未得到充分研究。
方法
在一个大型前瞻性收集的EC队列中，采用免疫组织化学（IHC）评估Claudin-6膜表达，队列包含1106个原发肿瘤和187个转移病灶。依据胃癌评分标准对Claudin-6表达进行评分，并分析其与临床病理特征及随访数据的相关性。
结果
18%的EC可检出Claudin-6表达，全部样本中10%为高表达；浆液性肿瘤和癌肉瘤的高表达比例分别为49%和22%。多变量分析显示，Claudin-6高表达可独立预测较差的疾病特异性生存期（HR：1.7，95% CI：1.2–2.4，P=0.002）。在原发灶—转移灶配对队列中，19%的原发肿瘤为Claudin-6高表达，其中77%在至少1个对应转移病灶中维持高表达。
结论
本研究确定Claudin-6是EC的独立预后标志物，也是潜在ADC治疗靶点，尤其适用于浆液性癌和癌肉瘤亚型。
背景
EC是人类发展指数较高国家最常见的妇科恶性肿瘤，5年总生存率为84%。遗憾的是，EC的发病率和死亡率均在上升。所有风险类别患者的主要治疗均为切除子宫，可同时或不同时切除附件和卵巢，且常联合前哨淋巴结清扫。早期EC预后良好，但晚期或复发性疾病的生存率显著下降。高危患者最常用的辅助化疗为卡铂联合紫杉醇；近年来，免疫治疗也已获批用于晚期或复发性肿瘤。
ADC将药物与抗原特异性抗体结合，可提供靶向治疗。理想ADC能够结合肿瘤细胞表面的特异性抗原，从而尽量减少对健康组织的损伤。目前有多种ADC正在EC临床试验中，包括靶向人表皮生长因子受体2（HER2）、叶酸受体α（FRα）、滋养层细胞表面抗原2（Trop-2）、nectin细胞黏附分子4（NECTIN4）和B7同源物4（B7-p）的ADC。系统研究抗原表达有助于确定不同患者亚组最适用的ADC。本研究旨在探索并评价EC中的Claudin-6表达。
目前有3种靶向Claudin-6的ADC正在开展Ⅰ期临床试验（NCT05103683、NCT05394675、NCT06932094），其中2项试验已公布初步应答数据。TORL-1-23偶联强效微管抑制剂单甲基澳瑞他汀E（MMAE），正在晚期实体瘤（包括EC）患者中进行评估。初步数据显示，TORL-1-23耐受性良好；在CLDN6阳性铂耐药卵巢癌中，中等剂量2.4 mg/kg的客观缓解率（ORR）为67%（4/6）。EC患者的应答数据尚未公布。另一项试验评估以吡咯并苯二氮䓬（PBD）为载荷的Claudin-6 ADC DS-9606a。初步分析报告其安全性良好并观察到经确认的客观缓解，但仍有待更详细的应答数据。这些Ⅰ期试验的初步结果较为积极，显示Claudin-6作为ADC靶点的潜力。
Claudin是紧密连接蛋白，对细胞通透性、细胞极性、组织完整性和信号转导具有重要作用。Claudin-6表达与乳腺癌、非小细胞肺癌及结直肠癌CMS2亚型的良好结局相关；但也与肿瘤侵袭、增殖增加、凋亡减少以及膀胱癌、宫颈癌、EC和肾上腺皮质癌的不良预后有关。因此，Claudin-6在不同肿瘤中的作用可能受环境和分子背景影响。正常成人组织中的Claudin-6表达有限，且在部分肿瘤中与侵袭性相关，因此其可能同时作为预后标志物和ADC靶向治疗靶点。本研究在包含转移病灶组织的大型EC队列中评价Claudin-6蛋白表达，以识别特别适合Claudin-6 ADC治疗的EC亚组。
方法
患者系列
EC患者的肿瘤组织以前瞻性方式收集并保存于Bergen妇科肿瘤生物样本库。临床病理数据来自医疗记录并保存于Bergen妇科肿瘤健康登记系统。基于人群的研究队列包含2001—2021年收集的1106例样本。该样本量足以在5%显著性水平下检出5年疾病特异性生存率（DSS）20%的差异。临床病理资料包括年龄、2009 FIGO分期、组织学类型、肿瘤分级、肿瘤大小、子宫肌层浸润深度及随访资料，平均随访时间为72个月。分子分型采用既往所述方法；术后风险依据ESMO指南分为低危、中危和高危。
免疫组织化学
将1106例EC患者的肿瘤组织制成组织芯片（TMA）。简而言之，对原发肿瘤及转移灶的福尔马林固定石蜡包埋（FFPE）样本制作全切片并行苏木精-伊红（HE）染色，识别每张切片中肿瘤含量最高的区域。从原发肿瘤FFPE供体蜡块中提取3个直径0.6 mm的组织柱，使用定制精密仪器包埋至受体TMA蜡块。TMA切片厚度为5 μm，并由病理科医师使用1张HE切片验证。
检测Claudin-6时，切片经二甲苯脱蜡和梯度乙醇复水，随后微波煮沸15 min进行抗原修复（pH 9，S2367，Agilent Dako）。使用过氧化物酶封闭液（S2023，Dako）处理8 min抑制内源性过氧化物酶活性。切片与1:200稀释的抗Claudin-6一抗（EPR28103-113，Abcam）孵育60 min，再与抗兔二抗（K4003，Dako）孵育30 min。随后室温使用二氨基联苯胺过氧化物酶（DAB；K3468，Dako）处理6 min，并以苏木精复染。切片经梯度乙醇脱水、二甲苯清洗后，使用Eukitt封片剂封片。
染色评价
蛋白表达依据胃癌HER2 IHC判读指南评分。根据3个组织芯中显示膜染色的肿瘤细胞比例及染色强度确定个体评分，仅评估膜染色；肿瘤组织不足的组织芯不纳入评价。每个转移病灶有1个直径1 mm的组织芯。膜反应肿瘤细胞<10%记为0分；>10%时，淡染记为1+，完整、基底外侧或侧膜弱至中等强度染色记为2+；>10%肿瘤细胞出现强膜反应记为3+。2名评价者独立对代表110例患者的随机TMA切片评分，全部评分的线性加权κ值为0.81。评分时均不知道患者临床病理特征和结局。
RNA测序
按照说明书使用AllPrep DNA/RNA mini kit提取肿瘤样本RNA。使用Illumina TruSeq Total GOLD构建cDNA文库（RNA输入量350 ng），采用Illumina HiSeq 4000进行75 bp双端测序。使用hiscat 2.0.5将原始reads比对至人类基因组GRCp8，并以Gencode v26作为转录组参考；分别使用Samtools和Feature Counts处理比对文件并计数比对reads，使用DESeq2进行计数标准化和差异表达分析。
统计学分析
使用IBM SPSS Statistics 29.0.2.0进行统计分析。Kaplan–Meier法绘制DSS曲线，以手术时间为起点、EC相关死亡时间为终点，组间生存差异采用Log-rank（Mantel–Cox）检验。分类变量采用Pearson卡方检验或Fisher确切检验。比较mRNA表达与蛋白检出情况的箱线图采用独立样本Kruskal–Wallis检验。采用Cox分析评估Claudin-6的独立预后意义，纳入变量之间未发现显著交互作用。
结果
Claudin-6高表达与EC侵袭性标志相关，并在浆液性肿瘤中高表达
采用胃癌评分标准评价1106个原发肿瘤的Claudin-6表达，染色范围从完全阴性到强染色，间质组织中未见表达。82%的样本完全不表达Claudin-6，评分为0；其余样本中8%为1+、6%为2+、4%为3+。随后将0和1+归为“低表达”，2+和3+归为“高表达”。
图1：子宫切除标本中Claudin-6的差异表达。TMA经IHC染色，依据胃癌评分标准评为0、1+、2+和3+，反映Claudin-6膜表达水平。上排比例尺：100 μm；下排比例尺：50 μm。
Claudin-6高表达与侵袭性疾病的临床病理特征显著相关：高表达患者年龄更大（平均71岁 vs. 66岁，P<0.001），更常为非子宫内膜样组织学（P<0.001）和较高FIGO分期（P=0.002）。子宫内膜样肿瘤中仅4%为高表达；非子宫内膜样亚型中，浆液性肿瘤为49%，癌肉瘤为22%，透明细胞癌为7%，未分化/其他肿瘤中未见高表达。少数高表达子宫内膜样肿瘤与更高分级显著相关（P<0.001）。
Claudin-6高表达还与拷贝数高（CNH）分子亚型显著相关，其中33%为高表达。部分患者有基因表达数据；CLDN6表达与Claudin-6 IHC表达水平显著相关。Claudin-6蛋白高表达患者具有较高CLDN6 mRNA水平和不同的基因表达模式；基因集富集分析显示，膜转运体活性相关基因集在Claudin-6高表达患者中富集。
表1：Claudin-6高表达与侵袭性疾病的临床病理因素相关。FIGO，国际妇产科联盟；POLE，DNA聚合酶ε；MMR-D，错配修复缺陷；CNL，拷贝数低；CNH，拷贝数高。组织学分级缺失13例、子宫肌层浸润缺失5例、分子亚型缺失171例。显著P值以原表粗体显示。
Claudin-6是EC不良生存的独立标志物
单变量分析显示，4个Claudin-6表达组与DSS显著相关：无表达患者的5年DSS率为89%，1+组为72%，2+组为59%，3+组为48%（P<0.001）。比较高、低表达时，Claudin-6高表达组5年DSS率为55%，低表达组为87%（P<0.001）。在子宫内膜样亚组中，Claudin-6高表达也与较差DSS相关（P=0.033）。
纳入年龄及ESMO术后低、中、高3级风险的多变量Cox回归显示，Claudin-6高表达可独立预测DSS降低（HR 1.7，95% CI：1.2–2.4，P=0.002），较低表达者的疾病相关死亡风险增加70%。但在仅分析子宫内膜样肿瘤时，Claudin-6不是独立预后标志物。
图2：Claudin-6高表达与不良预后相关。依据胃癌标准评估IHC Claudin-6表达（n=1106）的DSS Kaplan–Meier曲线。A，0、1+、2+和3+各评分组；B，全队列低表达（0、1+）与高表达（2+、3+）组；C，仅子宫内膜样亚组。括号内为患者总数/事件数。
表2：Claudin-6表达是EC独立术后预后标志物。事件数183；显著P值以原表粗体显示。HR，风险比；CI，置信区间。
Claudin-6在浆液性癌和癌肉瘤的EC转移病灶中高表达
晚期EC治疗成功依赖转移病灶的治疗反应。EC具有异质性，原发肿瘤蛋白表达未必代表对应转移病灶。全部原发肿瘤队列中10%（109例）为Claudin-6高表达。共有187例具有配对的原发肿瘤和转移病灶；其中19%（35例）原发灶为高表达，反映Claudin-6高表达与侵袭性疾病的相关性。
在35例原发灶高表达患者中，77%（27例）在全部转移灶（17例）或部分转移灶（10例）维持高表达；23%（8例）在转移灶中丢失表达并被归为低表达。在原发灶低表达的152例（81%）中，13%（20例）至少1个转移病灶转为高表达，其余87%（132例）对应病灶均维持低表达。总体有25%（47例）至少1个转移病灶为Claudin-6高表达。
图3：Claudin-6在转移病灶中频繁表达。分析187例配对原发肿瘤（PT）及对应转移病灶。A，PT中高表达（2+、3+）及低表达（0、1+）患者数；B，PT高表达患者转移病灶的表达；C，PT低表达患者转移病灶的表达。
分亚型图显示，非子宫内膜样EC原发肿瘤高表达比例高于子宫内膜样EC。低级别子宫内膜样肿瘤的转移灶极少高表达，3级子宫内膜样肿瘤也仅少数转移灶高表达；浆液性癌和癌肉瘤的转移病灶则有很高比例为Claudin-6高表达，提示Claudin-6 ADC可能特别适用于这些亚型患者的转移性疾病。
图4：转移病灶中保留Claudin-6表达。方格图展示原发肿瘤及配对转移病灶的Claudin-6表达。CC，透明细胞癌；CS，癌肉瘤；EEC，子宫内膜样子宫内膜癌；NEEC，非子宫内膜样子宫内膜癌。
讨论
化疗是晚期和复发性EC的标准治疗，但会产生耐药以及严重、长期不良反应。ADC通过靶向递送化疗药物并显著减少脱靶效应，成为有前景的新治疗方式。尽管ADC发展迅速、临床获批数量增加，但靶向HER2的德曲妥珠单抗（ENHERTU®）是目前唯一获FDA批准用于EC的ADC，尚未获EMA批准。其他多种ADC可能对EC有效，因此迫切需要详细绘制候选靶点的表达图谱。本研究显示Claudin-6在侵袭性EC中高表达，可独立预测较差DSS，并在浆液性癌和癌肉瘤转移灶中频繁表达。
Claudin-6是参与细胞间相互作用的膜蛋白，其在肿瘤生长和转移中的作用尚不明确，且可能取决于具体背景。在1106个原发肿瘤中，18%为Claudin-6阳性（≥1+），10%为高表达（≥2+）；晚期FIGO分期、非子宫内膜样亚型、浆液性癌和癌肉瘤的表达最高。既往551例EC研究中，91%的浆液性肿瘤CLDN6 mRNA高表达；本队列浆液性肿瘤Claudin-6蛋白≥1+和≥2+的比例分别为68%和49%。高表达也更常见于CNH肿瘤。胃癌中，高CLDN6与TP53变异和不良结局相关，且97%的CLDN6高表达肿瘤属于染色体不稳定分子亚型。
Claudin-6高表达在膀胱癌、宫颈癌、EC和肾上腺皮质癌中与较差生存相关，但在非小细胞肺癌、乳腺癌和部分结直肠癌亚型中与更好生存相关。功能研究显示其在乳腺癌中具有抑癌作用，而在EC、肝细胞癌和胃癌中具有致癌作用。本研究在校正年龄和ESMO术后风险后，Claudin-6仍为独立预后标志物，因此除作为ADC靶点外，还可能辅助患者风险分层。
由于癌组织中阳性表达而正常组织中不表达或仅微量表达，Claudin-6具有跨癌种ADC靶点潜力，并已推动3项Ⅰ期实体瘤临床试验。不过，哪些EC亚型最可能获益仍不清楚。本研究识别出原发灶Claudin-6阳性的EC患者亚组（10%），其中包括目前主要接受含铂辅助化疗的侵袭性最高肿瘤。约50%的此类患者应答不佳，再次使用含铂化疗效果有限。TORL-1-23在与浆液性EC具有共同生物学特征的铂耐药卵巢癌中显示活性，提示铂耐药浆液性EC也可能获益，但这仍需包含EC患者的最终临床试验数据验证。
本研究首次评估配对原发和转移病灶间的Claudin-6表达模式。原发灶高表达者中77%至少1个转移灶维持高表达，其中48%全部转移灶阳性，29%有1个或多个阳性转移灶。后一亚组表达存在异质性，Claudin-6 ADC可能不足以治愈疾病，但或可降低疾病负荷、延长生存。转移队列原发灶高表达比例为19%，高于人群队列的10%，提示Claudin-6可能参与EC转移，但这一推断仍需功能研究证实。
EC细胞系研究提示Claudin-6参与调控细胞增殖、迁移和侵袭：敲低Claudin-6可降低Hec-1B细胞增殖和迁移，Ishikawa细胞中过表达产生相反作用；Ishikawa异种移植模型中过表达增强肿瘤生长和侵袭。研究亦提示其与PI3K/AKT/mTOR和雌激素信号有关，但受方法学限制，应谨慎解释。未来需要使用先进的患者来源EC模型解析通路相互作用及其在进展、转移中的作用。无论其是否为疾病进展驱动因素，Claudin-6在部分浆液性癌和癌肉瘤中高表达，均可能成为有效ADC靶点。
局限性
ADC疗效依赖ADC与抗原的特异性结合。本研究使用商业化Claudin-6抗体，并报告5%的EC肿瘤为Claudin-6高表达。不能完全排除其与Claudin-9等其他抗原的交叉反应；但基因表达数据显示Claudin-6蛋白与CLDN6 mRNA显著相关，与其他Claudin家族成员不相关，支持靶点特异性。与所有生物标志物研究一样，临床实施前仍需验证靶点特异性，并确定最佳染色条件和评分阈值。
结论
Claudin-6是EC的独立预后标志物。其与不良生存和侵袭性疾病特征相关，提示Claudin-6 IHC既可增加预后信息、辅助临床决策，也可筛选可能适合ADC治疗的患者。Claudin-6在侵袭性子宫内膜肿瘤的原发灶和转移灶中均呈高表达，支持在临床试验中继续推进靶向Claudin-6的ADC。
文献来源：Gullovsen VL, Pavlicenco D, Hjelmeland ME, et al. High expression of the ADC target Claudin-6 associates with aggressive endometrial cancer and remains high in metastatic lesions. BJC Reports. 2026. doi:10.1038/s44276-026-00225-x.
